TUNEL FITC Apoptose-Nachweis-Kit A111-01

TUNEL FITC Apoptose-Nachweis-Kit A111-01

Während der Apoptose werden intrazelluläre spezifische Endonukleasen aktiviert, die Chromatin-DNA wird spezifisch zwischen Nukleosomen gespalten, und die DNA wird in ganzzahlige Vielfache von etwa 180-200 bp-Fragmenten zerlegt. Das bei der DNA-Fragmentierung entstehende 3'-Hydroxyl (3'-OH)-Ende kann unter der Einwirkung der terminalen Desoxynucleotidyltransferase (TdT) an Fluorescein-12-desoxyuridintriphosphat (FITC-12-dUTP) binden. Mit FITC-12-dUTP markierte DNA kann direkt durch Fluoreszenzmikroskopie beobachtet oder durchflusszytometrisch quantitativ analysiert werden, um den Grad der Apoptose zu bestimmen. Dieses Kit optimiert die Markierungsreaktion, indem es das optimale Verhältnis von Fluorescein-Markierung und unmarkierten dNTPs verwendet, um Nukleotide am 3'-OH-Ende einzubauen, so dass das Ende desselben gebrochenen DNA-Fragments einen längeren "markierten Schwanz" bilden kann. Der "markierte Schwanz" verringert die sterische Hinderung der Markierungsgruppen an den benachbarten eingebauten dNTPs, erhöht die Anzahl der Fluorophore am Ende jedes gebrochenen DNA-Fragments und verringert die Aggregation und das Quenching, das durch die benachbarten Fluorophore verursacht werden kann. Dadurch wird die Nachweisempfindlichkeit verbessert und unspezifische Reaktionen werden reduziert.

Komponenten: A111-01: 25 rxns

• 5 x Equilibration Buffer: 1.25 ml
• FITC-12-dUTP Labeling Mix: 100µl
  
• Recombinant TdT Enzyme: 20µl
• Proteinase K (2 mg/ml): 40µl
• DNASEI (1 U/µl): 5µl
• 10 x DNase I Buffer: 100µl

Hinweis:

Das TUNEL-FITC-Apoptose-Kit sollte bei -20 ℃ gelagert werden, und die FITC-12-dUTP-Markierungsmischung sollte vor Licht geschützt und bei -20 ℃ für bis zu 12 Monate gelagert werden.